Standardization of a rapid quadruplex PCR method for the simultaneous detection of bovine, buffalo, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes DNA in milk / [Padronização de um método rápido de PCR quadriplex para a detecção simultânea de DNA de bovino, bubalino, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em leite]

The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

Adesão, internalização e sobrevivência de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em mangas (Mangifera indica), variedade 'Tommy Atkins' / Adhesion, internalization and survival of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes in mangoes (Mangifera indica), variety 'Tommy Atkins'

Surtos de salmonelose e listeriose associados ao consumo de frutas inteiras ou minimamente processadas ocorrem com frequência. O objetivo deste estudo foi investigar a capacidade de adesão e internalização de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em mangas (Mangifera indica) variedade Tommy Atkins, em diferentes condições de contaminação experimental e tratamento hidrotérmico, bem como avaliar a multiplicação dos patógenos internalizados na polpa das frutas durante armazenamento em refrigeração (8oC ) e temperatura ambiente (25oC). O estudo foi conduzido com as cepas S. Enteritidis ATCC 13076, S. Thyphimurium ATCC 14028, L. monocytogenes ATCC 7644 e L. monocytogenes Scott A. Inicialmente as cepas foram avaliadas segundo o índice de hidrofobicidade e capacidade de formação de biofilme em poliestireno. A adesão à superfície da manga foi avaliada por técnicas microbiológicas e também pela técnica de microscopia eletrônica de varredura. A internalização foi avaliada a partir de inoculação na cicatriz do pedúnculo (6 log UFC/mL) e após tratamento hidrotérmico e imersão em solução contaminada (6 log UFC/mL), mantidas a 8 °C e a 25 °C por 24h, 5 e 10 dias. A sobrevivência foi avaliada através da inoculação em região demarcada, em cenário de baixo (2 log UFC/mL) e alto nível de contaminação (6 log UFC/mL), a 8 °C e 25 °C, nos tempos 0, 1, 2, 3, 5 e 10 dias. A adesão foi observada nos dois patógenos, mesmo após sucessivas lavagens, com diferença significativa (p<0,05) após 1h de exposição e observou-se presença de estruturas exopolissacarídicas em diferentes tempos e condições de temperatura. A internalização ocorreu em todas as amostras avaliadas e a região do pedúnculo foi a mais afetada pela contaminação, diferindo significativamente na comparação com a região blossom end (p<0,05) a 8 °C e 25 °C. A sobrevivência foi observada nas duas temperaturas até o décimo dia. A multiplicação a 8°C foi significativamente mais baixa (p<0,05). Os resultados demonstraram que a Salmonella spp e L. monocytogenes são capazes de aderir à superfície, de internalizar e se alastrar pela polpa e ainda sobreviverem por períodos consideráveis, em 8 °C e 25 °C. Esses dados poderão auxiliar produtores e órgãos de saúde no desenvolvimento de avaliações quantitativas de risco e no estabelecimento de medidas adequadas para evitar surtos

Outbreaks of salmonellosis and listeriosis associated with the consumption of whole or minimally processed fruits occur frequently. The aim of this study was to investigate the ability of spp. and Listeria monocytogenes to adhere and internalize in mangoes (Mangifera indica) variety Tommy Atkins, under different conditions of experimental contamination and hydrothermal treatment, as well as evaluate the multiplication of the internalized pathogens in the fruit pulp during storage under refrigeration (8oC) and room temperature (25oC). The study was conducted with the strains S. Enteritidis ATCC 13076, S. Thyphimurium ATCC 14028, L. monocytogenes ATCC 7644 and L. monocytogenes Scott A. Initially the strains were evaluated according to the hydrophobicity index and capability to form biofilms on polystyrene surface. Adhesion to the mango surface was evaluated by microbiological techniques and also by scanning electron microscopy. Internalization was evaluated by inoculating the peduncle scar (6 log CFU / mL) and immersion of the fruits in contaminated solution (6 log CFU / mL) after hydrothermal treatment, during storage at 8 °C and 25 °C for 24h, 5 and 10 days. Survival was assessed by inoculation in a demarcated region, using low (2 log CFU / mL) and high level of contamination (6 log CFU / mL), and storage at 8 °C and 25 °C during 0, 1, 2, 3, 5 and 10 days. Adhesion was observed for both pathogens, even after successive washes, with a significant difference (p <0.05) after 1 h of exposure. Adhesion was mediated by exopolysaccharide structures, observed at different times and temperature conditions. Internalization occurred in all samples and the peduncle region was the most affected by the contamination, differing significantly in comparison with the blossom end region (p <0.05) at 8 °C and 25 oC. Survival was observed at both temperatures until the tenth day. The multiplication at 8 °C was significantly lower than at 25 oC (p <0.05). The results showed that Salmonella spp and L. monocytogenes were able to adhere to the surface, to internalize and spread through the pulp and still survive for considerable periods, at 8 °C and 25 °C. This data may help producers and health agencies to develop quantitative risk assessments and to establish appropriate measures to prevent outbreaks

Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil / Pesquisa de Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica em carcaças de suínos no sul do Brasil

The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1). A similar profile was observed regarding to Enterobacteriaceae, and medians were calculated as follow: -0.426 log CFU.cm-1 in Slaughterhouse A; 0.2163 log CFU.cm-1 in B; and 0.633 log CFU.cm-1 in C. Regarding the pathogens investigated, L. monocytogenes was not detected and only one carcass from Slaughterhouse C was positive for Y. enterocolitica. Thus, the results suggest a very low prevalence of L. monocytogenes and Y. enterocolitica in the sampled population. A total of 65 (17.2%) carcasses were positive for S. enterica, with a difference in frequencies between slaughterhouses and slaughter days. The prevalence of Salmonella positive carcasses was higher in the Slaughterhouse C (25.4%; CI 95% 19-32%) in comparison with A (9.5%; CI 95% 9-14%) and B (18.3%; CI 95% 12-24%). There was no significantly statistical association between Enterobacteriaceae counts and Salmonella isolation on carcass surface (p=0.69). The slaughtering day, nested within the slaughterhouse, explains 31.3% of Salmonella prevalence variability. S. Typhimurium (38.1%) was the most prevalent, followed by S. Infantis (30.1%). Among the 61 Salmonella strains tested for resistance to antimicrobials, 18 (31.6%) were full-susceptible. No strain displayed resistance to azithromycin, ceftazidime, cefotaxime and meropenem. The highest resistance frequency was displayed to tetracycline (54.1%), followed by ampicillin (50.82%), nalidixic acid (42.62%) and chloramphenicol (42.62). Multi-resistance was detected in 52.54% of the, strains. In conclusion, S. enterica is more prevalent in pre-chill pig carcasses than Y. enterocolitica and L. monocytogenes and thus should be prioritized in monitoring and control programs at slaughter. Salmonella serovars varied among slaughterhouses and present significant differences in their resistance to antimicrobials. Slaughterhouses that present higher medians of TAM or Enterobacteriaceae in a monitoring period may have higher S. enterica prevalences as well. However, there is a high variation of S. enterica prevalence among slaughter days, which cannot be always related to the hygienic indicators counts observed on a given day.(AU)

A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente), enquanto em C uma mediana de MAT mais elevada foi determinada (2,216 log CFU.cm-1). Um perfil semelhante foi observado em relação a Enterobacteriaceae, sendo as medianas calculadas para A, B e C, respectivamente: -0,426 log CFU.cm-1; 0,2163 log UFC.cm-1; e 0,633 log UFC.cm-1. Em relação aos patógenos investigados, L. monocytogenes não foi detectada e apenas uma carcaça, do Matadouro C, foi positiva para Y. enterocolitica. Portanto, os resultados sugerem uma prevalência muito baixa desses patógenos na população amostrada. Em um total de 65 (17,2%) carcaças houve isolamento de S. enterica, com diferença nas frequências observadas entre matadouros e dias de abate. A prevalência de carcaças positivas para S. enterica foi maior no Matadouro C (25,4%; IC95% 19-32%) em comparação com A (9,5%; IC95% 9-14%) e B (18,3%; IC95% 12-24%). Não houve associação estatística entre o número de Enterobacteriaceae e o isolamento de S. enterica na superfície das carcaças (p=0,69). O dia de abate agrupado por frigorífico explica 31,3% da variação na prevalência de Salmonella. O sorovar mais frequente de S. enterica foi Typhimurium (38,1%) seguido de S. Infantis (30,1%). Entre as 61 cepas de S. enterica testadas quanto à resistência a antimicrobianos, 18 (31,6%) foram totalmente suscetíveis aos antimicrobianos testados. Nenhuma cepa apresentou resistência a azitromicina, ceftazidima, cefotaxima e meropenem. As maiores frequências de resistência foram demonstradas contra tetraciclina (54,1%), ampicilina (50,8%), ácido nalidíxico (42,62%) e cloranfenicol (42,62%). Em 52,54% das cepas foi detectada multi-resistência. Em conclusão, S. enterica é mais prevalente em carcaças suínas no pré-resfriamento do que Y. enterocolitica e L. monocytogenes. Portanto, S. enterica deve ser priorizada em programas de monitoramento e controle ao abate. Os sorovares de Salmonella variam entre matadouros e apresentam diferenças significativas na resistência a antimicrobianos. Matadouros de suínos que apresentam medianas de MAT e Enterobacteriaceae num período de monitoramento podem apresentar também prevalências mais de altas de presença de S. enterica. Entretanto, há uma alta variabilidade na frequência de S. enterica entre dias de abate, e nem sempre há relação entre essa frequência e a contagem de indicadores higiênico-sanitários determinados num determinado dia.(AU)

Comparación de tres técnicas para subtipificación molecular de Listeria monocytogenes / Comparison of three molecular subtyping techniques for Listeria monocytogenes

Abstract Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen. The recent alert for L. monocytogenes in vegetables from Argentina warns about the importance of reinforcing its isolation, characterization and subtyping in food, clinical and environmental samples. The aim of the present study was to compare the discriminatory power of enterobacterial repetitive interpower; genic consensus polymerase chain reaction (ERIC-PCR), automated ribotyping and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) to subtype strains of L. monocytogenes isolated from Argentine meat and environmental samples. Simpson's Diversity Index (DI) was calculated on the basis of based on the dendrograms obtained in the by cluster analysis, showing the following discriminatory power: ApaI-PFGE (0.980), AscI-PFGE (0.966), ribotyping (0.912), ERIC-PCR (0.886). The ID values between ApaI- and AscI-PFGE and between ribotyping and ERIC-PCR were not significantly different. Of the three techniques evaluated, PFGE showed the highest discriminatory power. However, the subtyping techniques should be accompanied by effective food monitoring strategies and reliable clinical and epidemiological studies.

Resumen Listeria monocytogenes es un patógeno alimentario. La reciente alerta por la presencia de L. monocytogenes en vegetales en Argentina advierte sobre la importancia de reforzar el aislamiento, la caracterización y la subtipificación de esta bacteria en muestras clínicas de alimentos y ambientales. El objetivo del presente estudio fue comparar el poder discriminatorio de enterobacterial repetitive intergenic consensus polymerase chain reaction (ERIC-PCR), la ribotipificación automatizada y la pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) para subtipificar cepas de L. monocytogenes aisladas de carne y de muestras ambientales en Argentina. El índice de diversidad (ID) de Simpson, calculado a partir de los dendrogramas obtenidos en el análisis de agrupamiento, mostró los siguientes resultados: Apal-PFGE (0,980), AscI-PFGE (0,966), riboti-pado (0,912), ERIC-PCR (0,886). Los valores obtenidos no fueron significativamente diferentes al comparar entre Apal- y AscI-PFGE, ni entre ribotipadoy ERIC-PCR. De las técnicas evaluadas, la PFGE presentó el mayor poder discriminatorio. Sin embargo, las técnicas de subtipificación deberían acompañarse de estrategias de control de los alimentos efectivas y de estudios clínicos y epidemiológicos confiables.

Caracterización genética de cepas de Listeria monocytogenes aisladas durante los años 2007-2014 en Chile / Genetic characterization of Listeria monocytogenes strains isolated during 2007-2014 in Chile

Resumen Introducción: Listeria monocytogenes es un patógeno transmitido por alimentos que causa listeriosis, una enfermedad que puede presentarse como gastroenteritis febril o en una forma invasora que tiene altas tasas de mortalidad. Hasta el momento, ha sido poco estudiada la diversidad genética de cepas de L. monocytogenes aisladas desde pacientes, alimentos y fuentes ambientales en Chile. Objetivo: Caracterizar genéticamente cepas de L. monocytogenes de estos tres orígenes recibidas por el Instituto de Salud Pública de Chile (ISP) entre los años 2007 y 2014. Material y Métodos: Se seleccionaron 94 cepas de L. monocytogenes correspondientes a 94 pulsotipos diferentes identificados por electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE), se extrajo ADN y se realizó serotipificación mediante reacción de polimerasa en cadena (RPC) y tipificación de secuencias multilocus (MLST). Resultados: El serotipo más común fue 4b (55,3%), seguido de 1/2a (25,5%), 1/2b (17%) y 1/2c (2,2%). Se identificaron 32 secuencias tipo (ST), de las cuales cuatro fueron nuevas, y las predominantes fueron ST1 (28,7%) y ST2 (13,8%). La totalidad de las cepas se agrupó en los Linajes I y II. Conclusiones: Se observó una gran variabilidad genética en las cepas de L. monocytogenes analizadas, siendo predominantes las secuencias tipo ST1 y ST2, ambas pertenecientes al Linaje I. Nuestros resultados contribuyen a conocer la estructura poblacional de este patógeno en Chile y su presencia en muestras clínicas, alimentos y el medio ambiente.

Background: Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen that causes listeriosis, a disease that can present as febrile gastroenteritis or as an invasive form that has high mortality rates. So far, the genetic diversity of strains of L. monocytogenes isolated from patients, foods and environmental sources in Chile has been poorly studied. Aim: To characterize genetically L. monocytogenes strains received by the Institute of Public Health of Chile (ISP) between 2007 and 2014. Methods: We selected 94 strains of L. monocytogenes corresponding to 94 different pulsotypes identified by pulsed field gel electrophoresis (PFGE), DNA was extracted and serotyping was performed by polymerase chain reaction (PCR) and multilocus sequence typing (MLST). Results: The most common serotype was 4b (55.3%), followed by serotypes 1/2a (25.5%), 1/2b (17%) and 1/2c (2.2%). 32 sequence-type (ST) were identified, of which 4 were new, and the predominant ones were ST1 (28.7%) and ST2 (13.8%). All the strains of L. monocytogenes were grouped in Lineages I and II. Conclusions: A great genetic variability was observed in the strains of L. monocytogenes analyzed, being predominant the ST1 and ST2, both belonging to Lineage I. Our results contribute to know the population structure of this pathogen in Chile and its presence in clinical samples, food and the environment.

Isolamento de Listeria monocytogenes em salsichas comercializadas no Distrito Federal / Isolation of Listeria monocytogenesin sausages commercialized in the Distrito Federal

A bactéria Listeria monocytogenes é o patógeno causador da listeriose, importante doença transmitida por alimentos que acomete humanos e animais podendo causar morte. Foram coletadas 100 amostras de salsicha de mercados do Distrito Federal. A metodologia usada para o isolamento foi a descrita na Instrução Normativa Nº 40 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. As amostras que apresentaram motilidade característica de Listeria sp p. foram submetidas a técnica de PCR para confirmação da espécie L. monocytogenes. Os resultados positivos para Listeria sp p. foram vistos em 14 amostras e em 5 confirmou-se a presença de L. monocytogenes. Através dos resultados desse experimento conclui-se que salsichas podem estar contaminadas com bactérias do gênero Listeria sp p. e L. monocytogenes, oferecendo risco de listeriose aos consumidores.

Pesquisa de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em queijo mussarela fatiado comercializado em hipermercados de Recife-PE / Search of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes in sliced mussarella cheese marketed in hypermarkets of Recife-PE

O queijo mussarela, tipo mais utilizado no Brasil em preparações culinárias especialmente por características como fatiamento e derretimento, está sujeito a contaminações microbiológicas durante todo o processo que o leva à mesa do consumidor. Diante disso, objetivou-se pesquisar Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em queijo mussarela fatiado comercializado em hipermercados de Recife-PE. Foram analisadas quarenta e nove amostras de queijo mussarela fatiado e todas foram negativas para os microrganismos pesquisados. Porém, observou-se Listeria innocuaem 4,1% das amostras (2/49). Estes resultados sugerem provável falha de higienização no local de fatiamento ou embalagem do produto, sendo necessárias ações que garantam a inocuidade dos alimentos ofertados ao consumidor, de forma a não pôr em risco a saúde pública.

Resistência antimicrobiana em isolados de Listeria monocytogenes provenientes de alimentos e ambientes de processamento de alimentos / Antimicrobial resistance in Listeria monocytogenes isolates from food and food processing environments

Diversos estudos relatam distintos níveis de resistência antimicrobiana entre os isolados de L. monocytogenes, o que pode ter implicações no tratamento de listeriose. Este estudo avaliou o perfil de resistência de 30 isolados de L. monocytogenes provenientes de alimentos e ambientes de processamento de alimentos do sul do Brasil. Todos os isolados apresentaram resistência ao ácido nalidíxico e a cefoxitina, além de ter sido observada alta ocorrência de isolados resistentes à clindamicina. Para alguns antimicrobianos (rifampicina, tetraciclina, eritromicina, estreptomicina, meropenem, trimetoprim-sulfametoxazol) foi detectado baixo percentual de resistência e, para os demais antimicrobianos testados, não foi observada resistência. Como conclusão, apesar de ter sido observado perfil de resistência para alguns antimicrobianos, os isolados foram suscetíveis aos antimicrobianos comumente utilizados no tratamento de listeriose.

Papel da interação entre bactérias láticas isoladas de alimentos na produção de bacteriocinas / Role of interactions among lactic acid bacteria isolated from foods on production of bacteriocins

Bacteriocinas produzidas por bactérias láticas (BAL) apresentam um importante potencial de aplicação na bioconservação de alimentos, por sua ação antimicrobiana contra algumas espécies de microrganismos patogênicos de relevância, como Listeria monocytogenes. Este estudo analisou o efeito da interação entre cepas selecionadas de BAL produtoras de bacteriocinas com outras BAL viáveis ou não viáveis (bacteriocinogênicas ou não) na indução da produção de bacteriocinas. O efeito dos metabólitos produzidos por estas cepas na indução da bacteriocinogênese também foi avaliado. As cepas produtoras de bacteriocinas selecionadas para o estudo foram Lactobacillus sakei MBSa1, produtora de sakacina A e Pediococcus acidilactici ET34, produtora de pediocina, isoladas de salame e salmão defumado, respectivamente. A produção de pediocina por P. acidilactici ET34 foi avaliada também em leite em pó desnatado reconstituído, além de meio de cultura (caldo MRS). Os resultados indicaram que, quando em co-cultura com Enterococcus faecalis ATCC12755, Lactobacillus sakei ATCC15521 ou Listeria monocytogenes (cepas 104, 711 e 637), ou na presença do sobrenadante livre de células (SLC) dessas culturas, nenhuma das duas cepas testadas produziu maior quantidade de bacteriocina do que a produzida quando em monocultura ou na ausência do SLC. A bacteriocina produzida por P. acidilactici ET34 apresentou um efeito bacteriostático contra L. monocytogenes 104 no leite em pó desnatado reconstituído nas 12 h analisadas, com extensão da fase lag, de forma dose-dependente. Os resultados indicaram, também, que P. acidilactici ET34 não foi capaz de produzir pediocina no leite em pó desnatado reconstituído quando em monocultura ou em co-cultura, ao contrário do observado para o caldo MRS. Mais investigação é necessária para esclarecer os efeitos de possíveis interações entre as BAL presentes em um alimento, bem como o efeito dos componentes dos alimentos na produção das bacteriocinas pelas BAL bacteriocinogênicas

Bacteriocins produced by lactic acid bacteria (LAB) present an important application potential in food biopreservation, by their antimicrobial activity against some species of pathogenic microorganisms of relevance, such as Listeria monocytogenes. This study analyzed the effect of the interaction between selected strains of bacteriocin-producing LAB with other viable or non-viable LAB (bacteriocinogenic or not) in the induction of bacteriocin production. The effect of the metabolites produced by these strains on the induction of bacteriocinogenesis was also evaluated. The bacteriocin-producing strains selected for the study were Lactobacillus sakei MBSa1, producer of sakacin A and Pediococcus acidilactici ET34, producer of pediocin, isolated from salami and smoked salmon, respectively. The production of pediocin by P. acidilactici ET34 was also evaluated in reconstituted skimmed milk powder as well as culture medium (MRS broth). The results indicated that when co-cultivated with Enterococcus faecalis ATCC12755, Lactobacillus sakei ATCC15521 or Listeria monocytogenes (strains 104, 711 and 637), or in the presence of the cell free supernatant (SLC) of these cultures, neither of the two strains tested produced greater amount of bacteriocin than that produced in monoculture or in the absence of SLC. The bacteriocin produced by P. acidilactici ET34 presented a bacteriostatic effect against L. monocytogenes 104 in skimmed milk powder reconstituted in 12h, with extension of lag phase, in a dose-dependent manner. The results also indicated that P. acidilactici ET34 was not able to produce pediocin in the reconstituted skimmed milk powder when in monoculture or in co-culture, unlike that observed for the MRS broth. More research is needed to clarify the effects of possible interactions between BAL present in a food and the effect of food components on bacteriocin production by bacteriocinogenic BAL

Should arboviruses be the only diagnosis hypothesis in pregnant women in endemic areas presenting with a rash?

Abstract Listeria is an unusual pathogen that causes neonatal infection with high morbidity and mortality. We present the case of a premature newborn whose mother had a rash during pregnancy; the newborn had severe early sepsis because of Listeria monocytogenes and histopathologically suggestive findings of the placenta. Obstetricians and neonatologists should suspect listeriosis in cases with compatible epidemiological history, clinical features, and examination findings of the placenta.

Pesquisa de Listeria monocytogenes e Vibrio parahaemolyticus em amostras de pescada amarela (Cynoscion acoupa) comercializadas na cidade de São Luís, MA / Search of Listeria monocytogenes and Vibrio parahaemolyticus in samples of fish (Cynoscion acoupa) marketed in the city of Sao Luis, MA

[{"text": "O aumento no consumo de pescados\r\ndevido a mudanças nas dietas alimentares\r\nfez com que a pescada amarela\r\n(Cynoscion acoupa) se tornasse\r\numa das espécies mais consumidas\r\nno Maranhão. Apesar dos benefícios\r\nnutricionais, esse consumo traz\r\nconsigo riscos à saúde pública quando\r\nocorre contaminação. O objetivo\r\ndesta pesquisa foi verificar a presença\r\nde Listeria monocytogenes e Vibrio\r\nparahaemolyticus em amostras\r\nde pescada amarela (C. acoupa) vendidas\r\nnas feiras e supermercados de\r\nSão Luís/ MA. Foram coletadas 30\r\namostras de filés de pescada amarela\r\nem feiras e supermercados e o\r\nprocessamento dessas amostras foi\r\nfeito no Laboratório de Microbiologia\r\nde Alimentos e Água da Universidade\r\nEstadual do Maranhão.\r\nAs análises microbiológicas foram\r\nrealizadas segundo o Manual de Métodos\r\nde Análise Microbiológica de\r\nAlimentos. Constatou-se a ausência\r\nde V. parahaemolyticus e ausência\r\nde L. monocytogenes em 100% das\r\namostras. Pode-se concluir, assim,\r\nque os resultados estão de acordo\r\ncom a RDC nº 12 de 2001, da ANVISA,\r\ne que, apesar das amostras não\r\napresentarem os patógenos investigados,\r\nfaz-se necessária a criação\r\nde parâmetros para essas bactérias,\r\ncomo forma de prevenção dos riscos\r\nà saúde pública.(AU)", "_i": "pt"}]

Atividade de compostos antimicrobianos para aplicação em produtos cárneos processados prontos para consumo visando controle de Listeria monocytogenes / Activity of antimicrobial compounds for application in ready-to-eat meat products for the control of Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes é o microrganismo patogênico de maior relevância em carnes processadas prontas para consumo. A presença frequente de L. monocytogenes no ambiente pode levar a uma contaminação dos produtos após o processamento industrial e como esses produtos não passam por tratamento bactericida antes de serem consumidos, a saúde do consumidor pode estar em risco. Para inibir a multiplicação de L. monocytogenes nos produtos cárneos durante o armazenamento em refrigeração após o processamento, os fabricantes podem utilizar diversos aditivos antimicrobianos na formulação destes produtos. Este estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana de aditivos tradicionalmente empregados em produtos cárneos processados, e de quatro novos blends preparados à base de nisina (Nisaplin®) contra cepas de L. monocytogenes, fazendo-se a avaliação in vitro e in situ, em mortadelas experimentalmente contaminadas, formuladas com os compostos estudados, armazenadas à vácuo e em refrigeração (8 °C) por 70 dias. Os compostos extrato de alecrim, diacetato de sódio e Nisaplin®, quando testados in vitro, apresentaram maior eficiência na inibição das cepas de L. monocytogenes que lactato de sódio e vinagre tamponado. Quando testados in vitro, os produtos comerciais BioVia® CL600 e NovaGARD® LM100 e os quatro blends utilizados no preparo das mortadelas foram igualmente efetivos na inibição de L. monocytogenes. De acordo com os resultados dos testes in situ, o melhor controle de L. monocytogenes em mortadelas durante 70 dias a 8 °C ocorreu nos produtos preparados com o blend contendo extrato de alecrim, diacetato de sódio, vinagre tamponado e Nisaplin®. O blend contendo extrato de alecrim, lactato de sódio e Nisaplin®, foi o menos efetivo entre os blends testados

Listeria monocytogenes is the most important microbial pathogen in ready-to-eat processed meat products. The frequent presence of L. monocytogenes in the environment can lead to product contamination after industrial processing and since these products do not have a bactericidal step before consumed, consumer health may be at risk. To inhibit the multiplication of L. monocytogenes in processed meat products during refrigerated storage, manufacturers may use various antimicrobial additives in the formulation of these products. This study aimed to evaluate the in vitro and in situ activity of additives traditionally used in processed meat products and four new blends based on nisin (Nisaplin®) against L. monocytogenes, in experimentally contaminated bolognas, formulated with the studied compounds and stored under vacuum and refrigerated (8 °C) for 70 days. Rosemary extract, sodium diacetate and Nisaplin®, when tested in vitro, were more effective than sodium lactate and buffered vinegar for the inhibition of the L. monocytogenesstrains. When tested in vitro, the commercial products BioVia® CL600 and NovaGARD® LM100 and the four blends used in bologna preparation were equally effective in inhibiting L. monocytogenes. According to the results of the in situ tests, the best control of L. monocytogenes in bolognas for 70 days at 8 °C occurred in the products prepared with the blend containing rosemary extract, sodium diacetate, buffered vinegar and Nisaplin®. The blend containing rosemary extract, sodium lactate and Nisaplin®, was the least effective among the tested blends

Prevalence and serotype distribution of Listeria monocytogenes isolated from foods in Montevideo-Uruguay

ABSTRACT The aim of this work was to study the prevalence of Listeria monocytogenes in foods obtained in retail shops and food industries located in Montevideo-Uruguay, and to identify the serogroups of the obtained isolates. Three-thousand one-hundred and seventy-five food samples (frozen, deli meats, ready-to-eat and cheese) were analyzed. The obtained isolates were serogrouped by multiplex PCR and serotyped by conventional procedure. Genetic comparisons were performed using pulsed-field gel electrophoresis on a sub-set of isolates belonging to the same serotype successively recovered from the same establishment. L. monocytogenes was isolated from 11.2% of samples. The highest prevalence was observed in frozen foods (38%), followed by cheese (10%). 1/2b and 4b were the most frequently identified serotypes. In six of 236 analyzed establishments we successively recovered L. monocytogenes isolates belonging to the same serotype. Most of them corresponded to serotype 1/2b. Pulsed-field gel electrophoresis profiles suggest that at least 33% of L. monocytogenes 1/2b isolates are genetically related and that may remain viable for prolonged periods. The observed prevalence of L. monocytogenes was lower than reported in neighboring countries. Our findings highlight the role that frozen foods may play in the spread of this pathogen, and the relevance of serotypes 1/2b and 4b.

Brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos estudiados mediante técnicas moleculares / Foodborne disease outbreaks studied by molecular techniques

RESUMEN Objetivo Aplicar una técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiple en tiempo real para la detección de Salmonella spp., Listeria monocytogenes y Yersinia enterocolitica, como herramienta de apoyo diagnóstico en la vigilancia de brotes de enfermedad transmitida por alimentos. Materiales y Métodos Se aplicó la metodología molecular en muestras clínicas provenientes de individuos que estaban asociados a brotes de enfermedad transmitida por alimentos de dos departamentos de Colombia. Los resultados se compararon con los datos arrojados por la metodología convencional de cultivo. Adicionalmente a los aislamientos obtenidos se les evaluó relación clonal mediante la técnica de electroforesis de campo pulsado (PFGE). Resultados Se determinó un total de 123 casos de enfermedad transmitida por alimentos de los cuales 45 muestras biológicas fueron confirmadas por laboratorio y 88 mediante nexo epidemiológico. La metodología molecular detectó 35/45 muestras positivas frente a 17/45 muestras positivas detectadas mediante la metodología convencional. La PFGE demostró relación clonal en cada brote. Conclusión Los resultados del estudio demuestran la aplicabilidad de la técnica molecular como herramienta útil de apoyo diagnóstico en la caracterización de brotes de enfermedad transmitida por alimentos, permitiendo una respuesta oportuna y confiable.(AU)

ABSTRACT Objective To apply a multiplex real-time polymerase chain reaction (PCR) technique to detect Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Yersinia enterocolitica as a diagnostic support tool for the surveillance of foodborne disease outbreaks. Materials and Methods Molecular methodology was applied on clinical samples taken from individuals who were associated with foodborne disease outbreaks in two departments of Colombia. The results were compared with the data obtained by conventional culture methodology. In addition, the clonal relation of the isolations was evaluated using the Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) technique. Results 123 cases of foodborne disease were determined, of which 45 biological samples were confirmed by laboratory and 88 by epidemiological link. The molecular methodology detected 35/45 positive samples versus 17/45 positive samples detected by conventional methodology. PFGE demonstrated a clonal relation during each outbreak. Conclusion The results of the study demonstrate the applicability of the molecular technique as a useful diagnostic support tool to characterize foodborne disease outbreaks, allowing a timely and reliable response.(AU)

Avaliação microbiológica de couve minimamente processada comercializada nos supermercados de Brasília ­ DF / Microbiological evaluation of minimally processed brassica commercialized in the supermarkets of Brasília - DF

No Brasil, a couve minimamente processada é comercializada durante todo o ano e geralmente é considerada segura para o consumo pelos consumidores. Este estudo avaliou a qualidade microbiológica de seis diferentes marcas de couve minimamente processada comercializadas em supermercados de Brasília. As análises realizadas foram: contagem total de bactérias mesófilas e psicrotróficas, determinação de coliformes totais e coliformes termotolerantes e identificação molecular de E. coli, Salmonella spp. e L. monocytogenes por sequenciamento de DNA. Os resultados revelaram que as amostras de couve minimamente processada apresentaram baixa qualidade microbiológica. Coliformes termotolerantes foram encontrados em todas as amostras de couve minimamente processada, com populações superiores a 2 log NMP/g em metade das amostras. Após o sequenciamento de DNA, E. coli O157:H7 foi identificada em 2 das 6 amostras e Salmonella enteritidis foi identificada em 1 das 6 amostras. Listeria monocytogenes foi encontrada em metade das amostras, sendo que a presença desta bactéria é geralmente associada a um período excessivo de armazenamento ou estocagem em temperaturas abusivas. Estes resultados mostraram que a couve minimamente processada exposta ao consumo nos supermercados de Brasília pode ser um veículo para a transmissão de bactérias patogênicas e indicaram a necessidade de melhorar a qualidade na cadeia de produção dos vegetais minimamente processados para garantir a vida útil e a segurança microbiológica desses produtos.(AU)

Caracterización clínica de la meningitis aguda de la comunidad causada por Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae y Listeria monocytogenes en adultos en el Hospital Carlos van Buren entre los años 2013 y 2016 / Clinical characteristics of community-acquired acute meningitis caused by Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae and Listeria monocytogenes in adults in Carlos van Buren Hospital between 2013-2016

INTRODUCCIÓN: la meningitis bacteriana es una enfermedad infecciosa aguda grave, que por su letalidad y costos en atención de salud genera un alto impacto en Salud Pública. Los agentes causales más frecuentes son Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae y Listeria monocytogenes, pero poco conocemos de nuestra realidad local. MATERIALES Y MÉTODOS: estudio descriptivo, con revisión de base de datos del laboratorio de microbiología del Hospital Carlos Van Buren, obteniendo datos de los cultivos de líquido céfalo raquídeo de pacientes mayores de 15 años entre marzo de 2013 y noviembre de 2016. RESULTADOS: 128 casos de meningitis bacteriana aguda, de los cuales 17 fueron por los microorganismos objetivos del estudio, siendo el más frecuente S. pneumoniae, clínicamente un 58% se presentó sin signos meníngeos. A 30 días del diagnóstico un 35% había fallecido, la mitad de ellos inició el tratamiento antibiótico pasadas las 24 horas desde su ingreso al hospital. En el 46% la tinción gram no evidenció bacterias. DISCUSIÓN: los microorganismos clásicamente descritos como agentes causales parecen no explicar la totalidad de los cuadros de meningitis bacteriana aguda en la población adulta estudiada, la ausencia de signos meníngeos no permite descartar la sospecha diagnóstica. La mitad de los pacientes fallecidos inició el tratamiento antibiótico pasadas las primeras 24 horas.

INTRODUCTION: bacterial meningitis is a serious acute infectious disease whose lethality and elevated health costs have a serious impact on public health. The most frequent causes are Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenza and Listeria monocytogenes, but we know little of the local situation. MATERIALS AND METHODS: A descriptive study reviewing Carlos van Buren Hospital´s microbiology laboratory data base, and obtaining the details of cerebrospinal fluid cultures of patients over the age of 15 between March 2013 and November 2016. RESULTS: 128 cases of acute bacterial meningitis of which 17% were caused by the micro-organisms of study, the most frequent being Streptococcus pneumoniae. 58% of patients had no meningeal signs. At 30 days from diagnosis 35% had died, half of these having started antibiotic treatment over 24 hours after admission. 46% of the Gram stains showed no bacteria. DISCUSSION: the classical infectious agents do not appear to account for the totality of acute bacterial meningitis in the population studied. The absence of meningeal signs should not rule out the diagnosis. Half of the patients who died started antibiotic treatment after the first 24 hours.

Growth, viability and architecture of biofilms of Listeria monocytogenes formed on abiotic surfaces

Abstract The pathogenic bacterium Listeria monocytogenes can persist in food processing plants for many years, even when appropriate hygienic measures are in place, with potential for contaminating ready-to-eat products and, its ability to form biofilms on abiotic surfaces certainly contributes for the environmental persistence. In this research, L. monocytogenes was grown in biofilms up 8 days attached to stainless steel and glass surfaces, contributing for advancing the knowledge on architecture of mature biofilms, since many literature studies carried out on this topic considered only early stages of cell adhesion. In this study, biofilm populations of two strains of L. monocytogenes (serotypes 1/2a and 4b) on stainless steel coupons and glass were examined using regular fluorescence microscopy, confocal laser scanning microscopy and classic culture method. The biofilms formed were not very dense and microscopic observations revealed uneven biofilm structures, with presence of exopolymeric matrix surrounding single cells, small aggregates and microcolonies, in a honeycomb-like arrangement. Moreover, planktonic population of L. monocytogenes (present in broth media covering the abiotic surface) remained stable throughout the incubation time, which indicates an efficient dispersal mechanism, since the culture medium was replaced daily. In conclusion, even if these strains of L. monocytogenes were not able to form thick multilayer biofilms, it was noticeable their high persistence on abiotic surfaces, reinforcing the need to focus on measures to avoid biofilm formation, instead of trying to eradicate mature biofilms.

Virulence genes and genetic relationship of L. monocytogenes isolated from human and food sources in Brazil

ABSTRACT The herein presented assay provided a bacteriological and molecular characterization of 100 samples of L. monocytogenes isolated from human (43) and food (57) sources, from several regions of Brazil, and collected between 1975 and 2013. Antigenic characterization defined 49% of serotype 4b samples, followed by 28% of serotype 1/2b, 14% of serotype 1/2c, 8% of serotype 1/2a, and 1% of serotype 3b. Both type of samples from human and food origin express the same serotype distribution. Multiplex PCR analysis showed 13 strains of type 4b with the amplification profile 4b-VI (Variant I). Virulence genes hly, inlA, inlB, inlC, inlJ, actA, plcA, and prfA were detected in all samples, highlighting a deletion of 105pb on the actA gene in 23% of serotype 4b samples. Macrorestriction profile with ApaI at PFGE showed 55 pulsotypes, with the occurrence of the same pulsotype in hospitalized patients in São Paulo in 1992 and 1997, and two other highly related pulsotypes in patients hospitalized in Rio de Janeiro in 2008. Recognized pulsotypes in listeriosis cases have also been detected in food. Thus, the prevalence of a serotype and the persistence of certain pulsotypes herald future problems.

Ação de diferentes extratos de algumas variedades do gênero Capsicum sobre o desenvolvimento bacteriano / Action of different extracts of some varieties of the Capsicum on bacterial development

Arqueologicamente datam-se os registros do consumo de pimentas há 9000 anos no território mexicano. No período entre 1500 e 2000, as sementes e os frutos das pimentas ficaram mais conhecidas e seu uso cresceu significativamente. Com o aumento rápido e progressivo de cepas microbianas resistentes a antibióticos e aditivos químicos, procura-se, na tecnologia de alimentos, o combate a deteriorantes alimentícios, a partir de extratos vegetais naturais utilizando- -se ações secundárias dos vegetais, como a operação antimicrobiana e, portanto, reduzindo o uso de aditivos químicos. Considerando o mencionado, este trabalho teve como objetivo avaliar a ação antibacteriana de extratos de algumas variedades de pimentas (Capsicum spp.): Trinidad Scorpion (P1), Baiana (P2), Cumari do Pará (P3), Habanero Vermelha (P4) e Habanero Chocolate (P5); e também dos mesmos vegetais combinados. Utilizou-se o método de difusão em gel de Ágar. As placas de Petri com meio de cultura Ágar Nutriente foram semeadas previamente com os seguintes micro-organismos: Bacillus cereus, Bacillus subtilis (ATCC 6633), Salmonella Typhimurium (ATCC 14028), Salmonella Enteritidis e Staphylococcus aureus (ATCC 25923), posteriormente incubadas a 35°C por 24 e 48 horas. Halos de atividade antimicrobiana considerados significativos foram aqueles de diâmetro igual ou maior que 10 mm. Observou-se ação antibacteriana significativa sobre B. subtilis pela variedade Cumari do Pará (halo de 10 mm), pelas combinações P1+P2 (halo de 12 mm), P2+P3 (halo de 11 mm) e P2+P4 (halo de 10 mm); sobre S. aureus pela variedade Trinidad Scorpion (halo de 12 mm), combinações P1+P2 (halo de 11 mm), P1+P3 (halo de 10 mm), P2+P3 (halo de 10 mm), P2+P4 (halo de 12 mm) e P3+P4 (halo de 11 mm); sobre S. Typhimurium pela variedade Habanero Vermelha (halo de 13 mm), pelas combinações P1+P5 (halo de 10 mm) e P3+P5 (halo de 10 mm). Nenhuma variedade de pimenta ou combinação das mesmas exerceu ação significativa sobre S. Enteritidis. S. aureus foi inibida significativamente por um maior número de extratos.